Condicions bàsiques per al cultiu cel·lular
1. Medi de cultiu cel·lular adequat
Un medi de cultiu cel·lular adequat és una de les condicions més importants per al creixement i proliferació cel·lular in vitro. El medi de cultiu no només proporciona nutrició cel·lular i substàncies bàsiques per promoure el creixement i la proliferació cel·lular, sinó que també proporciona un entorn de vida per al creixement i la reproducció de cèl·lules cultivades.
2. Sèrum d'alta qualitat
Actualment, la majoria dels mitjans sintètics requereixen l'addició de sèrum. El sèrum és un dels components més importants en el medi de cultiu cel·lular, que conté una varietat de factors de creixement i altres nutrients necessaris per al creixement cel·lular.
3. Temperatura de creixement cel·lular constant
Per mantenir el creixement vigorós de les cèl·lules cultivades, hi ha d'haver una temperatura constant i adequada.
4. Entorn de gas adequat
El gas és una de les condicions necessàries per a la supervivència de les cèl·lules dels mamífers, i els gasos necessaris són principalment oxigen i diòxid de carboni.
5. Temperatura del cultiu cel·lular
Per mantenir el creixement vigorós de les cèl·lules cultivades, hi ha d'haver una temperatura constant i adequada. Els diferents tipus de cèl·lules tenen diferents requisits per a la temperatura del cultiu. La temperatura estàndard per al cultiu cel·lular humà és de 36,5 °C ± 0,5 °C. La desviació d'aquest rang de temperatura afectarà el metabolisme normal de les cèl·lules i fins i tot morirà.
6. Entorn de gas adequat
El gas és una de les condicions necessàries per a la supervivència del cultiu cel·lular dels mamífers, i els gasos necessaris són principalment oxigen i diòxid de carboni. L'oxigen participa en el cicle de l'àcid tricarboxílic, produint energia per al creixement i proliferació cel·lular i sintetitzant diversos components necessaris per al creixement cel·lular.
Contaminació comuna del cultiu cel·lular
1. Contaminació bacteriana
La contaminació bacteriana és la més freqüent. Una vegada que l'operació és lleugerament inadequada, causarà contaminació cel·lular. Després de la contaminació bacteriana, apareixerà com a fines tires negres de sorra quan s'observi sota el microscopi. En forma de vareta, etc. En segon lloc, el medi de cultiu es torna groc i tèrbol, i els sediments en forma de sorra fina es poden veure clarament a la placa de Petri, i hi ha una olor estranya de tant en tant.
2. Contaminació per fongs
La solució de cultiu contaminat per fongs és clara i transparent, no com un gran brot d'infecció bacteriana, de manera que és difícil detectar-la precoçment. De vegades sembla un filament sota el microscopi, de vegades sembla un corall, i lentament creixerà un filament negre molt fi. Quan és massa tard, és difícil que les cèl·lules siguin rescatades.
3. Contaminació de motlles
D'acord amb les infeccions per fongs, perquè el medi de cultiu és clar, la contaminació per fongs és difícil de detectar precoçment, quan sovint és massa tard. Les impureses floculents van aparèixer lentament en el medi de cultiu, i els objectes flotants de massa filamentosa es podien veure sota el microscopi, com a aments en el vent. Les cèl·lules encara poden créixer, però amb el temps, les cèl·lules es deterioren i deixen de créixer.
4. Infecció per micoplasma
El medi de cultiu es torna tèrbol. Després que el micoplasma infecti les cèl·lules, els canvis citopàtics no són evidents, però l'estat cel·lular empitjora i el creixement s'alenteix. Pot haver-hi petites taques negres sota el microscopi, però el medi de cultiu generalment no és tèrbol. Després que les cèl·lules van ser passades, van aparèixer taques negres intercel·lulars, les cèl·lules van ser vacuolades, i moltes cèl·lules s'assemblaven a l'apoptosi i la necrosi. Finalment, les cèl·lules van surar i van morir completament.
Prevenció de la contaminació cel·lular
L'establiment de bones regles i regulacions pot recórrer un llarg camí en la reducció de la contaminació cel·lular. Incloent sistema d'accés, normes de funcionament i sistema de gestió diari.
Sistema d'accés: inclòs el personal i els materials. El personal ha de ser entrenat abans de poder operar per si mateix, i ha de complir els requisits de desgast abans d'entrar al laboratori, com bates blanques, bates d'aïllament, màscares, guants, etc. Per als articles necessaris, els articles no d'un sol ús han de ser estrictament esterilitzats i esterilitzats, i els articles comprats s'han de comprar en canals regulars i fiables. Les cel·les recentment comprades s'han de provar i verificar abans del seu ús.
Especificacions de funcionament: El millor és formular especificacions per a operacions rutinàries, i el personal de laboratori ha de seguir les especificacions de funcionament, que no es poden canviar a voluntat, i també cultivar bons hàbits de funcionament per al personal de laboratori. Per exemple, després de xuclar la punta de la pipeta, no s'estendrà al medi per segona vegada i es xuclarà una vegada una vegada una quantitat suficient de medi. En afegir líquid, el líquid s'ha d'afegir en suspensió tant com sigui possible, el que pot prevenir eficaçment la contaminació per micoplasma i la contaminació creuada cel·lular. A més, si és possible, només operar una línia cel·lular a la vegada, i és millor tenir un petit interval de temps entre les cèl·lules per evitar la contaminació creuada.
Sistema de gestió diària: Inclou normes i mètodes d'ús, neteja i manteniment del medi ambient i consumibles, reactius, etc. També hi ha la gestió del consum, inventari i adquisició de reactius i consumibles, inclosa la gestió d'inventari de dos nivells de mostres cel·lulars. Per a les fonts de contaminació que no són fàcils de trobar, el millor és realitzar proves regulars, principalment contaminació per micoplasma i contaminació creuada cel·lular.
BKMAM Bio proporciona els consumibles corresponents per al cultiu cel·lular:
Plats de petri de plàstic d'un sol ús:
Material de poliestirè d'alta transparència (PS);
La superfície és llisa i plana, i no hi ha distorsió òptica de les cèl·lules sota observació del microscopi;
El disseny d'apilament facilita l'apilament i l'emmagatzematge;
Esterilització d'òxid d'etilè (EO);
Resistència al desgast i a la corrosió.
Tractament adherent dels plats de cultiu cel·lular:
Material de poliestirè (PS);
Esterilització de feixos d'electrons, sense pirògens, sense toxina;
Tractament de la superfície del plasma al buit, excel·lent adherència cel·lular;
La superfície és llisa i plana, i no hi ha distorsió òptica de les cèl·lules sota observació del microscopi;
El disseny apilable facilita l'apilament i l'emmagatzematge.
Plaques de cultiu cel·lular de plàstic:
Material de poliestirè (PS);
Adequat per al cultiu cel·lular normal, tipus de placa de tractament no adherent;
Sense pirògens, sense toxina, esterilitzat;
Embalatge independent de tipus lacrimogen fàcil, fàcil d'operar;
Tractament adherent de plaques de cultiu cel·lular:
Material de poliestirè (PS);
Tractament adherent (tractament TC) tipus de placa, adequat per al cultiu de cèl·lules adherents;
Sense pirògens, sense toxina, esterilitzat;
Embalatge independent de tipus lacrimogen fàcil, fàcil d'operar;
Tots són fons plans.
Tractament adherent dels flascons de cultiu cel·lular:
Material de poliestirè (PS);
Esterilització de feixos d'electrons, sense pirògens, sense toxina;
Tractament de la superfície del plasma al buit, excel·lent adherència cel·lular;
Cobertura transpirable, que és propícia per a l'intercanvi de gasos i evita el pas de microorganismes.
Criovacials d'espín interns/externs:
Material de polipropilè 100% pur (PP);
Pot suportar 15psi, esterilització de 121 ° C;
La paret del tub s'espesseix i el cos del tub té escala i àrea d'escriptura;
Hi ha un segell d'anell de silicona entre el fil de la coberta de la canonada i el cos de la canonada per assegurar l'estanquitat;
Sense DNase, sense RNasa, sense pirògens, sense endotoxina.
